ישנם מספר כתמים שונים שניתן להשתמש בהם כדי לדמיין ולצלם DNA לאחר החומר הופרדו על ידי ג'ל אלקטרופורזה. בין הבחירות הרבות, אלה חמישה זנים הם התחלת הנפוץ ביותר עם ethidium bromide, שהוא הנפוץ ביותר. כאשר עובדים עם תהליך זה, חשוב לא רק לדעת את ההבדלים בין זנים אבל את הסיכונים הבריאותיים הגלומים.
01 את'ידיום ברומיד
Ethidium bromide הוא ככל הנראה הצבע המפורסם ביותר המשמש להדמיה DNA. צבע זה ניתן להשתמש בתערובת ג'ל, במאגר אלקטרופורזה או כתם הג'ל לאחר הפעלתו. מולקולות של צבע לדבוק גדילי DNA ו פלואורס תחת אור UV, מראה לך בדיוק היכן להקות נמצאים בתוך הג'ל. למרות היתרון שלה, החיסרון הוא כי ethidium bromide הוא מסרטן פוטנציאלי, ולכן זה חייב להיות מטופל בזהירות רבה. בגלל הסיכונים הבריאותיים הפוטנציאליים של עבודה עם ג'ל זה, חלופות נמצאו. 02 SYBR זהב
SYBR צבע זהב יכול לשמש כתם כפול או חד גדילי DNA, או כתם RNA. SYBR זהב היה אחד החלופות הראשונות ethidium bromide להכות את השוק וזה נחשב רגיש יותר מאשר ethidium bromide. תצוגות צבע 1000 פי יותר פלואורסצנציה UV פעם זה קשור חומצות גרעין. לאחר מכן חודר ג 'ל עבה וגבוה אחוזים agarose והוא יכול לשמש ג'ל פורמלדהיד. בגלל הקרינה של מולקולה מאוגד הוא כל כך נמוך, destaining אינו נדרש. בעל רשיון בדיקות מולקולריות יש גם (מאז ההשקה של SYBR זהב) פיתחה ומשווקת SYBR בטוח SYBR גרין שהם חלופות בטוחות יותר ethidium bromide.
03 SYBR ירוק
הכתמים הירוקים של ה- SYBR I ו- II (שוב, המשווקים על-ידי בדיקות מולקולריות) מותאמים למטרות שונות. בגלל שהם נקשרים לדנ"א, הם עדיין נחשבים למוטגנים פוטנציאליים ובגלל זה, הם צריכים להיות מטופלים בזהירות. SYBR ירוק אני רגיש יותר לשימוש עם DNA כפול תקועים, ואילו SYBR הירוק השני, לעומת זאת, הוא הטוב ביותר לשימוש עם DNA יחיד תקועים או RNA. כמו הכתם הפופולרי ethidium Bromide, כתמים רגישים אלה מתנפחים תחת אור UV. 04 SYBR בטוח
SYBR בטוח נועד להיות חלופה בטוחה יותר ethidium ברומיד כתמים SYBR אחרים. זה לא נחשב פסולת מסוכנת ניתן בדרך כלל להיפטר דרך מערכות ביוב רגיל (כלומר למטה לטמיון), כי בדיקות רעילות עולה כי אין רעילות חריפה. בדיקה גם מציין שיש מעט או ללא genotoxicity על תאים אוגר הסורי (SHE) תאים, לימפוציטים אנושיים, תאי לימפומה של עכבר, ובבדיקת AMES. הכתם יכול לשמש עם transilluminator אור כחול אשר גורם נזק פחות DNA להיות דמיינו ומציע יעילות טובה יותר עבור שיבוט מאוחר יותר. אווה גרין
אווה גרין הוא צבע פלואורסצנטי ירוק שנמצא כדי לעכב PCR במידה פחותה מאשר צבעים אחרים. זה עושה את זה מאוד שימושי עבור יישומים כמו כמותי בזמן אמת PCR. זה גם בחירה טובה אם אתה משתמש נמוך ג 'ל נקודת התכה להתאוששות של DNA. זה יציב מאוד בטמפרטורות גבוהות יש פלואורסצנטי נמוך מאוד בפני עצמו, אבל הוא פלואורסצנטי מאוד כאשר מחויב ל- DNA. אווה גרין הוכח גם להיות נמוך מאוד או לא cytotoxicity או mutagnicity.