כיצד להפוך את זה למאגר מכתים Immunohistochemical
פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) הוא פתרון חיץ זה נפוץ מכתים אימונוהיסטוכימיים (IHC) וזה משמש לעתים קרובות במחקר ביולוגי. PBS הוא פתרון מלח על בסיס מים המכיל נתרן מימן פוספט, נתרן כלורי, ובמקרים מסוימים, אשלגן כלורי ו אשלגן דיהידרוגן פוספט.
מכתים אימונוהיסטוכימיים
אימונוהיסטוכימיה מתייחס לתהליך של גילוי אנטיגנים כגון חלבונים בתאים של קטע רקמה באמצעות העיקרון של נוגדנים המחייבים במיוחד אנטיגנים ברקמות ביולוגיות.
מכתים Immunofluorescent היה שיטת מכתים immunohistochemical הראשון.
אנטיגנים הופכים גלויים כאשר מצמידים עם נוגדנים באמצעות צבעי הקרינה עקב תגובה אנטיגן נוגדנים תהליך זה מתרחש כאשר זה מופעל על ידי אור מרגש של אורך גל מסוים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
ריכוז האוסמולריות והיון של הפתרונות תואם לאלה של הגוף האנושי - הם איזוטוניים.
מתכון PBS
אתה יכול להכין PBS במספר דרכים. ישנן נוסחאות מרובות. חלק מהם אינם מכילים אשלגן, בעוד אחרים מכילים סידן או מגנזיום .
מתכון זה קל יחסית. זה עבור 10X PBS פתרון המניות (0.1M). עם זאת, ניתן גם לבצע פתרון 1X המניה, או להתחיל עם מתכון זה 10X ו לדלל אותו ל 1X.
התהליך כולו לוקח בערך 10 דקות.
אפשרות להוסיף Tween מסופק גם.
מה שאתה צריך לעשות מאגר PBS
- נתרן פוספט monobasic (נטול מים)
- סודיום פוספט dibasic (נטול מים)
- נתרן כלורי
- קנה מידה ושוקל סירות
- סטירר מגנטי ומערבבים
- בדיקה pH כי מכויל פתרונות מתאימים להתאמת pH
- בקבוק 1L volumetric
- Tween 20 (אופציונלי)
כיצד להפוך פוספט שנאגרו מלוחים (PBS)
לשקול 10.9 גרם נטול מים נתרן פוספט dibasic (Na2HPO4), 3.2g נטול פוספט נתרן monobasic (NaH2PO4), ו 90g נתרן כלורי (NaCl).
ממיסים רק מתחת 1L מים מזוקקים.
להתאים את ה- pH 7.4 ולהפוך את הפתרון עד נפח סופי של 1L.
מדולל 10X לפני השימוש ו לכוונן את ה- pH במידת הצורך.
אתה יכול לעשות פתרון PBS המכיל 0.5 אחוזים Tween 20 על ידי הוספת 5mL Tween 20 לפתרון 1L.
טיפים להכנת מאגר PBS
אחסן את המאגר בטמפרטורת החדר לאחר שביצעת את הפתרון PBS.
ריאגנטים שאינם מימיריים ניתן להחליף אבל תצטרך לחשב מחדש את המסה המתאימה של כל אחד כדי להתאים את המולקולות מים הוסיף.
שימושים של פוספט שנאגרו מלוחים (PBS)
פוספט שנאגרו מלוחים יש שימושים רבים כי זה איזוטוני ולא רעיל לרוב התאים. זה יכול לשמש כדי לדלל חומרים וזה משמש לעתים קרובות לשטוף מכולות של תאים. PBS יכול לשמש מדללת בשיטות שונות כדי ביומולקולות יבש כי מולקולות המים בתוכו יהיה מובנה סביב החומר, חלבון, למשל. זה יהיה "יבשים" ו משותקת על משטח מוצק.
ה- pH נשאר יציב ועקבי כדי למנוע הרס של תאים.
הסרט הדק של מים שקושר לחומר מונע denaturation או שינויים קונפורמטיביים אחרים. מאגרים קרבונט יכול לשמש לאותה מטרה אבל עם יעילות פחות.
PBS יכול לשמש גם לקחת ספקטרום התייחסות בעת מדידת ספיגת חלבון ב אליפסומטריה.