פעילות ספציפית וחשיבותה בבידוד חלבון

פעילות ספציפית היא מונח המשמש למדידת קצב התגובה של אנזים עם מצע. פעילות אנזים ספציפית (פעילות ספציפית בקיצור) היא מדד של טוהר האנזים ומצוטט ביחידות / מ"ג . הערך הופך להיות גדול יותר כמו הכנת אנזים הופך טהור יותר מאז כמות החלבון (מ"ג) הוא בדרך כלל פחות, אבל שיעור התגובה נשאר זהה (או עשוי להגדיל בשל הפרעה מופחתת או הסרת מעכבים).

מדידת אנזים קינטיקה

כמו קצת רקע, אנזימים הם חלבונים הפועלים כזרזים בהפחתת כמות של אנרגיה ההפעלה עבור התגובה להתרחש. אנרגיה ההפעלה היא האנרגיה הנדרשת כדי לקבל תגובות "התחיל" מאז תגובות רבות לא מתרחשות מהר מאוד (או להתרחש בכלל) אם הם תרמודינמית אפשרי.

האנזימים מזרזים תגובות ספציפיות באתר מסוים (הידוע כאתר הפעיל) שבו המגיבים נקשרים ומגיבים ליצירת המוצרים. מצעים יש אתרים פעילים ספציפיים רק להם, כך שאף חומרים אחרים לא להיקשר או להגיב באותו אתר. כמו מנעול ומפתח, כל אנזים יזרז רק תגובה אחת ספציפית (עם כמה חריגים).

פעילות ספציפית משמשת שיטות בידוד חלבון כדי לציין את אחוז הטיהור. חשוב לדעת את היחידה בעת רכישת אנזימים כדי לציין בדיוק כמה אנזים טהור אתה מקבל.

כאשר מודדים את קינטיקת האנזים (שיעור התגובה של אנזים עם מצע או משטח), פעילות ספציפית מוגדרת כסכום המצע האנזים הממיר (תגובות מזוקקות), לכל חלבון מ"ג בהכנת האנזים, ליחידת זמן.

דוגמה לפעילות ספציפית תהיה:

• הפעילות הספציפית של האנזים המבודד נמדדה בחלבון של 150 מ"ל / מ"ג / מ"ג לפני הטיהור ו -800 אמולס / min / mg, לאחר הטיהור.

פעילות ספציפית היא מדד חשוב של טוהר האנזים. לקבוצות שונות של אנזים טהור יש את אותם ערכים ואפילו דילול של תמיסת אנזים פעמים רבות יהיו ערכי פעילות ספציפיים זהים למרות שיהיו ערכי פעילות אנזים שונים. זאת משום שבחישוב פעילות ספציפית, המונה (יחידות / מ"ל) ומכנה (mg / ml) מושפעות באופן שווה.

הפעילות הספציפית שונה מאוד מהפעילות, אך חישוב הפעילות הספציפית תלוי עדיין בערך הפעילות. משמעות הדבר היא שערך הפעילות הספציפי יהיה תלוי גם בהגדרת יחידת האנזים.

אצוות של אנזימים בעלי ערך פעילות מסוים נמוך מהצפוי, עשויות להכיל מולקולות אנזימים שהשתנו או התערבבו עם טומאה.

גורמים המשפיעים על פעילות האנזים

ייתכן כי לאנזים אחד יש ערכי פעילות שונים שנמדדו במעבדות שונות (כלומר, הבדלים אמיתיים בפעילות הנמדדת, לא הבדלים ניכרים שנגרמים על ידי שימוש בהגדרות יחידה שונות).

הדרך assay מתבצעת (שיטת בדיקה כדי לקבוע את טוהר האנזימים) ישפיע על ערכי הפעילות המדווחים. לדוגמה, אנזימים הם בדרך כלל פעילים יותר בין טמפרטורות של 37 מעלות צלסיוס לעומת 20 מעלות צלסיוס, כך שאם assay מבוצע ב 21 מעלות צלזיוס, הערכים יהיו שונים מן מבחני שנערך בטמפרטורה של 32 מעלות צלזיוס (בדרך כלל , מבחני מתבצעים בטמפרטורה בין 20-37 מעלות צלזיוס).

לפיכך, ההגדרה של יחידת האנזים תתבטא טוב יותר כאשר יחידה אחת (U) היא כמות האנזים המזרז את התגובה של 1 nmol של המצע לדקה בתנאים סטנדרטיים.