איך endonuceleases אלה להתבלט
כמה אתה יודע על אנזימים הגבלה? קבל הבנה טובה יותר של מה שהם עושים ולמה הם חשובים, עם סקירה זו.
הגדרת אנזימי הגבלה
הגדילה של האנדוקלאסים היא סוג של אנזים שחותך את מולקולות הדנ"א. כל אנזים מזהה רצף ייחודי של נוקליאוטידים בחוט ה- DNA. רצפים כאלה הם בדרך כלל על 4 עד 6 זוגות בסיס ארוך. רצפים הם palindromic כי גדיל DNA משלימה יש את אותו רצף רק בכיוון ההפוך.
במילים אחרות, שתי גדילי הדנ"א נחתכים באותו מקום.
איפה אנזימים אלה נמצאו
אנזימי הגבלה נמצאים זנים שונים של חיידקים שונים בהם תפקידם הביולוגי הוא להשתתף בהגנה על התא. אנזימים אלה "מגבילים" דנ"א זר (למשל נגיפי) שנכנס לתא, על ידי השמדתו. לתא המארח יש מערכת של הגבלה-שינוי, המתיללת את ה- DNA שלו באתרים ספציפיים עבור אנזימי ההגבלות המתאימים, ובכך מגינה עליו מפני מחשוף. יותר מ -800 אנזימים ידועים התגלו כי לזהות יותר מ -100 רצפי נוקליאוטידים שונים.
שימוש בביוטכנולוגיה
אנזימי הגבלה משמשים ביוטכנולוגיה כדי לחתוך DNA לתוך גדילים קטנים יותר כדי ללמוד הבדלים אורך השבר בין אנשים (הגבלת שבר אורך פולימורפיזם - RFLP). הם משמשים גם שיבוט גנים.
טכניקות RFLP שימשו כדי לקבוע כי יחידים או קבוצות של אנשים יש הבדלים ייחודיים רצפי גנים דפוסי חשיבה להגביל באזורים מסוימים של הגנום.
הידע של תחומים ייחודיים אלה הוא הבסיס טביעת אצבע DNA . כל אחת משיטות אלה תלויה בשימוש של ג'ל אלקטרופורזה agarose ההפרדה של שברי ה- DNA. חיץ TBE, אשר מורכב בסיס Tris, חומצת בור, EDTA, נפוץ עבור agarose ג'ל אלקטרופורזה לבחון מוצרי DNA.
סוגי אנזימי הגבלה
ישנם שלושה סוגים שונים של אנזימים הגבלה. סוג אני חותך DNA במקומות אקראיים עד 1000 או יותר בסיס זוגות מאתר ההכרה. סוג III חתכים על כ 25 זוגות מהאתר. סוגי I ו- III דורשים ATP ועשויים להיות אנזימים גדולים עם מספר תת יחידות. אנזימים מסוג II, המשמשים בעיקר בביוטכנולוגיה, חותכים DNA בתוך הרצף המוכר ללא צורך ב- ATP והם קטנים ופשוטים יותר.
סוג II אנזימים הגבלה נקראים על פי המין החיידקי שממנו הם מבודדים. לדוגמה, EcoRI אנזים היה מבודד E. coli . רוב הציבור מכיר את התפרצויות E. coli במזון.
סוג II אנזימים הגבלה יכול ליצור שני סוגים שונים של חתכים תלוי אם הם לחתוך שתי גדילים במרכז רצף הכרה או כל קווצה קרוב יותר לקצה אחד של רצף הכרה.
חתך לשעבר יפיק "קצוות בוטים" עם שום overhangs נוקליאוטידים. זה האחרון מייצר "דביק" או "מלוכדת" מסתיים כי כל קטע וכתוצאה מכך של DNA יש overhang כי מחמאות את שברים אחרים. שניהם שימושיים בגנטיקה מולקולרית להכנת DNA וחלבון רקומביננטיים .
צורה זו של דנ"א בולטת כי היא מיוצרת על ידי קשירת (מליטה יחד) של שני או יותר גדילים שונים שלא היו מקושרים במקור יחד.